研究开发

 investigacion_sinae

SINAE 通过与公立和私立实体的合作发展了许多研究项目。公立实体其中有巴布罗·德奥拉维戴大学(Pablo de Olavide大学)和安达卢西亚生物发展研究中心(Centro Andaluz de Biología del Desarrollo ­– CABD ),而私立的则有琼斯研究所,东弗吉尼亚医学院-Jones Institute, Eastern Virginia Medical School-(诺福克,弗吉尼亚州,美国),OriginElle(蒙特利尔,加拿大),Cegyr(布宜诺斯艾利斯,阿根廷),Reprogenetics (利文斯顿,新泽西,美国),Recombine EU (毕尔巴鄂,西班牙), IVF Spain (阿利坎特,西班牙), Ginemed(塞维利亚,西班牙)及Miguel Servet医院(萨拉戈萨,西班牙)。

子宫内膜容受性诊断法的研发

月经周期中,子宫内膜会产生巨大的周期变化,此变化来源于类固醇激素和旁分泌分子的调节效果。子宫内膜周期可分为三个阶段:增生期,相当于子房里卵泡发育和成熟阶段;分泌期,这也称为黄体期;和月经期。若想让胚胎着床成功,其发育和内膜周期必须同步。

子宫内膜容受性是指其让胚胎成功着床的能力,而每周期里子宫只有少数几天有能使着床成功的状态,正是分泌期雌性激素和黄体激素量上升的时候。这个阶段被称为着床之窗 (WOI),在月经周期的第20和21天,在调节排卵的黄体生成素分泌之后的第7天。

此研究项目的主要目的是对子宫内膜容受的分子标记进行表征,以研发一种新的内膜容受性的诊断工具,过程中模拟内膜容受时所需的因素和环境以及调控有可能产生的免疫反应。此项目选择了Fluidigm平台的BioMark 96.96 IFC Dynamic Array这是一个新的实时荧光定量PCR(qRT-PCR),采用TaqMan荧光探针,所需的试剂和移液次数比其他技术少,纳米级的反应混合物,而最重要的是可同时分析96个样品中的96种基因,使其更为简单和实惠。

plataforma 96

图 的 平台样品。

在铜的影响下促使子宫内膜基质细胞凋亡铜子宫环会在子宫内释放出少量的铜,可却足以导致内膜细胞的生理与生化变化,而且还带有疼痛和出血的副作用。铜虽然是不可缺少的元素,但过量却会造成细胞凋亡,而此过程中细胞里的凋亡微管网络(Apoptotic microtubule network)会避免将其内容释放到细胞外空间。
该项目的目的是研究铜子宫环释放的铜量在人子宫内膜基质细胞造成的凋亡效果,并且观察凋亡微管网络的生成。为此采取了不同女人的内膜基质细胞,活检之前则有在她们每个周期阶段中使用了三种不同的铜量。之后,用荧光分析计算出了凋亡细胞百分比,并通过观察核碎裂、微丝缺乏及细胞形态对凋亡过程进行了定量。结果表示三种铜浓度都会造成凋亡微管的生成,而凋亡没有因为细胞在铜的长时间的影响下而增长。结论是铜子宫环者出血原因可能是因为在铜的影响下而造成其子宫内膜细胞凋亡。

图 凋亡微管网络生成,微丝缺乏及核碎裂,铜释放48小时后: 喜树碱,作为阳性对照的细胞毒毒品。

 Formacion de AMN

从人肿瘤样品中分析肿瘤标志物的表达以研发无转移生存预测试验和识别细胞排毒状态

世卫组织的最新数据显示全球有 1410万癌症新发病例及 820万癌症死亡。男性中肺癌是死亡率为最高,而女性则是乳癌。肿瘤组织的整体表达分析结果表示癌组织有独特的基因表达。此转录组足迹允许了标志物表征,通过预测试验对不同患者进行癌期辨别并预测其肿瘤发展或诊疗反应。目前美国食品药品监督管理局(FDA)验证过的测试有Ampliseq, Oncotype Dx和MammaPrint.然而,更实惠、更简单、更有效并能使化疗提高效率的测试研发是必须的。

项目的目的是研发三种新的测试:

  • 通过36种基因转录分析生成预测肺腺癌无转移生存率的测试。
  • 通过40种基因转录分析生成预测乳癌无转移生存率的测试。
  • 通过12种多要耐药ABC转运器基因分析生成细胞排毒状态测试。
此项目选择了Fluidigm平台的BioMark 96.96 IFC Dynamic Array这是一个新的实时荧光定量PCR(qRT-PCR),采用TaqMan荧光探针,所需的试剂和移液次数比其他技术少,纳米级的反应混合物,而最重要的是可同时分析96个样品中的96种基因,使其更为简单和实惠。

实验需要设计探针定量分析每个基因,并需采用肺腺癌患者RNA逆转录成cDNA。采取乳癌患者的cDNA之后就能进行标志物表达分析,并通过统计分析生成预测试验。

图 癌症基因预测方案(改编自等,)

 prognosis chino
宫外孕是年轻女性发病率和死亡率的一大因素。输卵管解剖损伤、手术后、病毒感染和吸烟都是风险因素,而接受辅助生殖和体外受精时这些因素的风险率会增加。然而也有许多宫外孕是在无风险因素的影响下产生的。宫外孕最严重的并发症是可能导致死亡的内出血。美国百分之 1.3 的身孕都属于宫外孕,而最新的流行病学研究则表示其为孕妇死亡概率的6%。
宫外孕早期发现有助于改善发病率早测。目前唯一的诊断法是β-hCG的连续测量(造成英国每年9百万英镑的开支)和B超,有时需达到一星期以上的诊断才能准确判断结果,之所以研发一种有效又急速的诊断法变成了一种需要。外来体是细胞内囊泡与质膜合并后释放出的纳米囊泡,其内的分子内容物取决于其来源于什么细胞类型。外来体一般存于体液中,特别是血液与尿液,所以便成了许多癌症、神经退行性疾病等诊断工具。

图 外来体和细胞外微泡的生源

 biogenesis
项目的主要目的是用新的组学(omics)技术对宫外孕妇进行血液外来体标志物表征,将其用于宫外孕早期诊断,以降低孕妇死亡率,手术,不孕不育等后遗症,并且减少现有的诊断方法费用。目前此项目采取了宫外孕妇 (n=6) 和宫内孕妇(n=6) 血液RNA样品,然后通过基因表达谱芯片(Whole Genome 44K, Agilent Technologies)对其基因组进行了整体分析。结果显示有57种基因表达差异,其中44种是过度表达而13种属于低表达,比例是正常的两倍(FC>2,0)并且统计学根据显著(p-value<0,05)。另外还使用了同样的样品针对以下基因设计了探针并通过定量PCR(RT-PCR)验证了其芯片的结果:ORM1, ORM2 和 UTS2。
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